非特异性酯酶染色非特异性酯酶染色的临床意义

文章插图
一、非特异性酯酶染色的实验
一、实验试剂：
1. 作用液：l/20mol/L磷酸盐缓冲液(PH7.4)40mg加10g/Lα-乙酸萘酚(以50%*做溶剂)0.8ml，充分振荡，直至最初产生的混浊物大部分消失为止，加重氮盐，(坚牢蓝B或其他种均可)40mg振荡，过滤后使用.
2. 1g/L甲基绿水港派
二、实验操作：
【非特异性酯酶染色非特异性酯酶染色的临床意义】l. 固定新鲜涂片置10%甲醛生理盐水固定5min
2. 流水冲洗5min
3. 加入37℃作用液中1小时
4. 水洗
5. lg/L甲基绿水溶液复染5min
6. 水洗，干后镜检.
NaF抑制试验：方法同上，在40ml作用液中加入氟化钠(NaF)6mg(每毫升作用液加NaF-l.5mg)，若阳性明显减弱或呈阴性，示被NaF抑制最好能计算NaF抑制率，其公式为：
(加NaF后NSE积分值/未加NaF时的NSE积分值)×100%凡抑制率>50%者，提示确受NaF所抑.四.实验判定结果：细胞质内有灰黑色或棕黑色弥漫性或颗粒状沉淀为阳性，胞质内无沉淀者为阴性。
二、非特异性酯酶染色是什么
AS-D-CE：主要存在在于粒细胞内，实为粒细胞系统的特异性酯酶(亦称SPE) 。急性粒细胞白血病(M1)、急性粒细胞白血病(M2)、早幼粒细胞白血病(M3)均呈阳性反应，但其阳性程度不一，其中M1阳性较弱，M2较强，M3最强(阳性细胞可达99%)，据报导AS-D-CE持续呈阳性反应者，提示急性粒细胞白血病病性恶化。
慢性粒细胞性白血病，粒细胞系统皆为阳性反应。急性单核细胞白血病绝大多数幼稚细胞呈阴性，少数细胞可呈微弱阳性。急性粒—单核细胞白血病，分化程度较好的原始粒细胞，及其以下阶段的粒细胞皆为阳性反应，但原始及幼稚单核细胞绝大多数呈阴性反应。红白血病原始及幼稚粒细胞呈阳性反应。原始及幼稚红细胞全部为阴性，急性淋巴细胞白血病均为阴性反应，AS-D-CE对鉴别急性粒细胞白血病与急性单核细胞白血病具有重要诊断价值。
非特异性酯酶染色检查nonspecificesterase，NSEα-醋酸萘酚酯酶(α-NSE)染色检查、单核细胞型酯酶染色检查能将基质液中的α-醋酸萘酚水解，产生α-萘酚，再与重氮染料偶联，形成不溶性的有色沉淀，定位于胞质内。胞质中出现有色沉淀者为阳性反应。因所用的重氮盐不同，阳性反应的沉淀可分灰黑色或棕黑色。此酶主要存在于单核系细胞中，故有人称之为单核细胞型酯酶。原单核细胞为阴性反应或弱阳性反应，幼单核细胞和单核细胞呈阳性反应。粒系细胞一般为阴性或弱阳性反应。淋巴细胞一般为阴性反应。对鉴别单核细胞白血病有重要意义。正常单核细胞和原始单及幼稚单核细胞均呈阳性反应，其他血细胞呈阴性或弱阳性反应。急性单核细胞白血病细胞呈强阳性反应，但单核细胞中的酶活性可被氟化钠抑制，故在进行染色时，常同时做氟化钠抑制试验。急性粒细胞白血病时，呈阴性反应或弱阳性反应，但阳性反应不被氟化钠抑制。因此，本染色法主要用于急性单核细胞白血病与急性粒细胞白血病的鉴别。
三、非特异性酯酶染色的影响因素
1.酶的活性随标本采集后的时间而逐步下降，应取材2d内染色。
2.a-NAE最佳反应pH为6.0～6.3之间。
3.染色时间和温度要相对恒定。
4.各种基质试剂由于其产品衍生物较多，染色效果可随产地、生产厂商及不同批号等因素相差甚远，所以每次操作应设阴、阳性对照。
5.在酯酶染色反应中切记基质浓度过高，医学教|育网搜集整理以防引起背景污染，冲洗困难，特别在冬天，易使涂片表面产生脂质沉淀，影响结果观察。

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