后来周瑜拒绝袁术册封的将军称号，向袁术提出要到居巢（今安徽桐城南）为长的请求 。居巢离长江很近，周瑜的企图是，从居巢顺流而下直奔江东 。袁术不知周瑜假途东归的用意，竟满足了周瑜的要求 。在居巢，周瑜结识了临淮东城（今安徽定远）的豪族鲁肃 。在他的劝说之下，鲁肃放弃东城长的官职，背叛袁术，与周瑜结伴东渡 。孙策考虑舒县周氏是庐江的名门望族，派周瑜为督，可以充分利用他的家族的社会影响，以招募人马，延揽人才，扩大力量 。
建安四年（199年），孙策与周瑜分率二万余人偷袭皖城 。轻取皖城后，周瑜随从孙策在寻阳和沙羡，分别打败回师救皖的刘勋以及赶来救授的黄祖 。经过几次大仗，孙策俘获对方部曲士兵三万余人，战船七千余艘，实力大增 。通过这次向西用兵，豫章（今江西南昌）、庐陵（今江西吉水西北）一带也尽归江东所有 。战争结束后，周瑜以中护军、领江夏太守的职务（孙策授予周瑜这一职务是在取皖城之前）镇守巴丘（今湖南岳阳），防范占据荆州（今湖南、湖北）的刘表东侵 。
联刘抗曹
建安十三年（208年），曹操占领荆州以后，水陆军号称八十万顺势南下，并给孙权下了战书 。孙权将书信给部下们看过之后，部下都大惊失色，以张昭为首的官员都劝孙权向曹操投降 。当时虽然有鲁肃在场主战，但位卑言轻，无法发挥作用，所以鲁肃让孙权把周瑜召回 。周瑜到后，向孙权分析了当下形势，如今北方尚未完全平定，马超、韩遂还驻兵函谷关以西，是曹操的后患 。而曹操舍弃鞍马，改用船舰，与生长在水乡的江东人来决一胜负 。现在正是严寒，战马缺乏草料 。而且，驱使中原地区的士兵远道跋涉来到江湖地区，不服水土，必然会发生疾疫 。这几方面是用兵的大患，而曹操都贸然行事 。将军抓住曹操的时机，正在今天 。我请求率领精兵数万人，进驻夏口，保证能为将军击破曹操 。认为曹操这次来就是来送死的 。周瑜的话坚定了孙权抗曹的决心，于是以周瑜为主帅，与刘备联合，火烧赤壁，重创曹操 。

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